清华大学附属垂杨柳医院病理科

　　引言

　　冰冻切片是术中快速病理诊断的关键技术，但操作中常遇到切片碎裂、卷曲、染色不佳等问题。本文系统梳理了5大常见问题，并提供解决方案，帮助您提高切片质量！

　　一、切片碎裂或分层

　　可能原因：

　　1. 组织未完全冷冻（温度不够低或冷冻时间不足）。

　　2. 切片刀钝或刀角设置不当。

　　3. 组织内含脂肪或纤维成分较多（如乳腺、甲状腺）。

　　解决方案：

　　①充分冷冻：

　　- 使用OCT包埋剂，确保组织在-20℃~-25℃下冷冻10~15分钟。

　　- 脂肪组织可预冷至-30℃。

　　②调整切片刀：

　　- 更换锋利刀片，刀角设置为5°~10°。

　　③辅助措施：

　　- 在组织表面滴加少量70%酒精，减少冰晶形成。

　　二、切片卷曲或皱褶

　　可能原因：

　　1. 切片厚度不均（太薄或太厚）。

　　2. 防卷板未调节到位。

　　3. 组织硬度不均（如肿瘤伴坏死）。

　　解决方案：

　　①控制切片厚度：

　　- 常规诊断用4~5um，特殊研究可切 10~20um。

　　②调节防卷板：

　　- 使防卷板边缘与刀片平行，距离切片约1mm。

　　③优化组织处理：

　　- 避免组织中有气泡或坏死区，必要时修平组织块。

　　三、切片粘刀或难以展开

　　可能原因：

　　1. 载玻片温度过低（与切片温差大）。

　　2. 切片时室温过高（导致组织软化）。

　　解决方案：

　　①预热载玻片：

　　- 用手指温热载玻片，或短暂放置于37℃温台。

　　②控制环境温度：

　　- 保持切片室温度在20℃~22℃，湿度40%~60%。

　　四、染色模糊或对比度差

　　可能原因：

　　1. 切片未及时固定（导致细胞溶解）。

　　2. 染色液过期或污染。

　　3. 冲洗不充分（残留苏木素或伊红）。

　　解决方案：

　　①快速固定：

　　- 切片后立即用95%酒精固定30秒~1分钟。

　　②更换染液：

　　- 苏木素每2周过滤，伊红每1个月更换。

　　③充分冲洗：

　　- 流水冲苏木素5~10秒，分化液（1%盐酸酒精）1~2秒。

　　五、组织脱落（脱片）

　　可能原因：

　　1. 载玻片未涂粘附剂（如多聚赖氨酸）。

　　2. 冲洗时水流过猛。

　　3. 组织富含血液或黏液（如胃肠道标本）。

　　解决方案：

　　①增强粘附：

　　- 使用正电荷载玻片或提前涂布APES胶。

　　②轻柔操作：

　　- 冲洗时水流方向与切片呈45°角，避免直接冲击。

　　冰冻切片操作口诀

　　1. 冷冻要透 (-25℃) → 2. 刀快角小 (5°) → 3. 防卷调好 →

　　4. 玻片微温 → 5. 快固定快染 → 6. 轻冲防脱

　　注：对疑难组织（如骨、脂肪），可先预实验优化条件！

　　您在冰冻切片中还遇到过哪些问题？欢迎留言讨论！

　　参考文献

　　[1]王伯沎，李玉松. 病理组织染色技术[M]. 2版. 北京：人民卫生出版社，2021: 145-168.

　　[2]BANCROFT J D, GAMBLE M. Theory and practice of histological techniques[M]. 7th ed. London: Churchill Livingstone, 2019: 173-215.

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　　[7]World Health Organization. Laboratory manual for histological techniques[Z]. Geneva: WHO, 2020.

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